CRIOCONSERVACIÓN DE SEMEN DE YAMÚ (Brycon siebenthalae): CALIDAD
Resumen
EXPERIMENTO I. Relación entre espermatocrito y concentración espermática y variación de la calidad seminal durante la estación reproductiva del yamú ( B. siebenthalae Setenta y cinco (75) machos adultos de yamú (B. siebenthalae) fueron inducidos hormonalmente para determinar la calidad seminal y la relación entre el espermatocrito (SPCTO) y la densidad espermática (DE), así como la variación estacional de estas características durante las épocas reproductivas de 2003 y 2004. El proceso de centrifugación para la determinación del SPCTO fue estandarizado en 14000 G durante 5 min. La densidad espermática fue evaluada mediante hemocitómetro utilizando una dilución 1:1200 con solución salina fisiológica. La relación entre SPCTO y DE fue positiva y altamente significativa (n=75; p<0.0001; r 2 = 0.79). Únicamente durante el inicio de la estación reproductiva (Febrero) la concentración espermática fue inferior (p<0.05) que en todos los demás meses evaluados.
EXPERIMENTO II. Determinación de la dosis inseminante con semen fresco y crioconservado. Para determinar el número mínimo de espermatozoides (sptz) móviles necesarios para fertilizar una cantidad conocida de oocitos, fueron evaluadas diferentes proporciones de sptz/oocito, utilizando semen fresco y semen crioconservado. Reproductores de yamú (B. siebenthalae) en estado de madurez sexual fueron tratados con extracto de hipófisis de carpa (EHC – 5,5 y 4,0 mg.kg -1 de peso corporal para hembras y machos, respectivamente) para inducir la ovulación y espermiación. Se evaluaron con semen fresco seis proporciones de sptz/oocito: 0/1, 50/1, 1.000/1, 10,000/1, 50,000/1 y 100,000/1 (n = 6) y con semen crioconservado ocho, así: 1,500/1, 3,000/1, 7,500/1, 15,000/1, 30,000/1, 60,000/1, 75,000/1 y 150,000/1 (n = 5). La concentración espermática fue determinada mediante cámara de Neubauer y el número de oocitos contando la cantidad presente en un gramo. Cada prueba consistió en seminar 2 g de oocitos (ca. 2800) con un volumen de 160 o 500 mL de semen fresco o descongelado, respectivamente. La fertilidad se evaluó 6 horas postseminación. En las proporciones con semen fresco de 0/1, 50/1, 1,000/1 y 10,000/1 la fertilidad aumentó (p<0,05) gradualmente desde 0 % hasta 65% (0 % , 16%, 34% y 65%, respectivamente), a partir de la cual se mantuvo estable y sin mostrar diferencias significativas (10,000/1: 65%; 50,000/1: 73% y para 100,000/1: 70%) (p>0.05). Por su parte, en las proporciones de semen descongelado 1,500/1, 3,000/1, 7,500/1, 15,000/1 y 30,000/1 la fertilidad aumentó (p>0,05) progresivamente: 18%, 22%, 25%, 28%, 33%; igualmente, entre 60,000/1 (41%) y 150,000/1 (46%) no hubo diferencia (p>0.05). El mayor porcentaje de fertilidad (61%) fue observado con la proporción 75,000/1. En conclusión, proporciones de 50,000 sptz/oocito con semen fresco y de 75,000 sptz móviles/oocito con semen descongelado, son suficientes para realizar eficientemente seminación artificial en esta especie.
EXPERIMENTO III. Efecto del volumen de empaque y de la temperatura de descongelación sobre la calidad seminal. Para evaluar el efecto de la temperatura de descongelación sobre la calidad de semen de yamú (B. siebenthalae) crioconservado en macropajillas, reproductores en estado de madurez sexual fueron tratados hormonalmente (5.75 mg y 4.0 mg.kg-1 de peso corporal de Extracto de Hipófisis de Carpa - EHC, hembras y machos, respectivamente) para inducir la ovulación y espermiación. La calidad del semen fue evaluada a través de la movilidad y fertilidad 15 a 30 d después de su congelación. Como diluyente fue utilizada una solución de glucosa (5.5% p:v) - yema de huevo (12% v:v) y DMSO (10% v:v) como crioprotector. La concentración espermática fue determinada en cámara de Neubauer y la movilidad después de la activación con bicarbonato de sodio (NaHCO3) al 1%. Se evaluaron tres volúmenes de empaque: 1.8, 2.5 y 4.0 mL (n=6 a 8). Para evaluar la fertilidad (6 h postseminación) 2 g de oocitos (ca. 2800) fueron seminados empleando 0.5 mL de semen descongelado (ca. 150,000 sptz por oocito). La temperatura de descongelación de 35º C mostró mejores porcentajes de fertilidad (p<0.05) cuando comparados con 80º C.
Finalmente, el tiempo de activación disminuyó significativamente en las pajillas de menor volumen (p<0.05).
EXPERIMENTO IV. Pruebas de fertilidad a escala comercial utilizando semen crioconservado en macropajillas de 4.0 mL. Con el fin de determinar la fertilidad de semen de yamú (B. siebenthalae) crioconservado en macropajillas fueron seminados oocitos en cuatro granjas productoras de alevinos del Departamento del Meta. Para este fin, reproductores en estado de madurez sexual fueron tratados con extracto de hipófisis de carpa - EHC - (5.5 mg y 4.0 mg.kg-1 de peso corporal, para hembras y machos, respectivamente) para inducir la ovulación y espermiación. El semen fue diluido en una solución de glucosa (5.5% p:v) - yema de huevo (12% v:v) y DMSO (10% v:v) como crioprotector y posteriormente empacado en macropajillas de 4.0 mL. Cada prueba de fertilidad consistió en seminar 40 g de oocitos con aproximadamente 5.0 mL de semen (ca. 70,000 sptz móviles/oocito) descongelado a 35° C. La fertilidad se evaluó 6 h postseminación. Los porcentajes de fertilidad con semen crioconservado fueron de 67 %, 75 %, 71 % y 51 %, para las granjas 1, 2, 3 y 4, respectivamente. Por el contrario oocitos fertilizados con semen fresco presentaron mayores (p<0.05) porcentajes de fertilidad (85%, 86 % y 77 %) cuando comparados con los índices de fertilización con semen crioconservado. A pesar que los porcentajes de fertilidad observados con semen fresco fueron significativamente superiores a aquellos con semen crioconservado, las tasas de fertilidad con este último son consideradas aceptables a escala comercial.
