GONADOTROPINAS EN SILURIFORMES SURAMERICANOS Y SUS RELACIONES FILOGENÉTICAS

  • Maria Fernanda Flórez-Gonzalez
Palabras clave: glycoproteins, gonadotropins, siluriformes, cloning

Resumen

Introducción- La ictiofauna continental de Colombia reporta 1435 especies, entre ellos el orden Siluriformes, con 524 especies (12 familias), entre ellas Pimelodidae y Heptateridae. La información recopilada sobre estas especies, es principalmente sobre su distribución y ecología reproductiva, pero poco se ha documentado sobre aspectos básicos de la endocrinología y estructura genómica de hormonas de interés reproductivo. Las gonadotropinas son heterodimeros conformados por dos subunidades, la subunidad α común para todas las glicoproteínas, y una subunidad β, la cual determina la actividad biológica y especificidad. Hasta la fecha han sido reportadas las secuencias génicas para 56 especies (14 ordenes). Para especies ícticas tropicales del nuevo mundo, la información recopilada en este aspecto, es limitada o poco documentada. Objetivo - Clonar y determinar la secuencias cDNA de las subunidades α y β de la gonadotropina luteinizante (LH) de cuatro Siluriformes suramericanos, y realizar comparaciones para determinar relaciones filogenética. Métodos – Se obtuvieron hipófisis de los especímenes, para realizar la extracción de RNA y síntesis de cDNA. Las condiciones de  PCR fueron MgSO4 2 mM, dNTP’s 0.2 mM, Primers 0.5 uM (específicos subunidad), Pfu DNA 2.5U, el perfil térmico fue 94°C x 2 min, 94°C x 1 min, 48 - 60°C  x 30seg y  72°C x 40 seg (35 ciclos) y 70°C x 5 min  (extensión final). Los productos de PCR fueron clonados en el vector pJET1.2/blunt, y verificados por PCR y secuenciados por Macrogen Inc. Posteriormente, se realizó un alineamiento BLAST con las secuencias de las bases datos (NCBI, EMBL, SwissPro) y analizados con el Software MEGA4 v4.0. Resultados – La subunidad α de las especies S. lima, P. grosskopfii y P. blochii, tienen una longitud del ORF de 351pb, codón de inicio ATG y codón de parada TAA, conservados para las especies. La homología de secuencias de nucleótidos fue superior 96.01% y de la predicción de aminoácidos del 100%. En las secuencias de la subunidad β, entre, las especies S. lima, P. grosskopfii y P. blochii, se determinó una longitud del ORF de 420pb. Sin embargo, R. quelen  fue de 423 pb. Los codones de inicio ATG y de parada TGA,  fueron conservados entre las especies analizadas, la homología de secuencias de nucleótidos estuvo entre 83.57% y 99.05% y de la predicción de aminoácidos entre 85.51% y 99.28%. Conclusiones –  Las secuencias de nucleótidos de la subunidad β presenta mayor variación aun entre  familias del orden,  comparativamente con la subunidad α. Se puede evidenciar el distanciamiento entre las familias Heptateridae y Pimelodidae, comparativamente se identifica menor homología (48.12 y  51.26%) con las familias de distribución geográfica en Asia (Hemigabrus) y Norte américa (Ictalurus) y mayor similitud  (83.57 y 87.29%) con la familia de Africa (Clarias).

Palabras claves: glicoproteínas, gonadotropinas, siluriformes, clonación

GONADOTROPINS IN SOUTH AMERICAN CATFISH AND  THEIR PHYLOGENETIC RELATIONSHIPS

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Publicado
2016-12-06