Introdução: O conhecimento das normas de biossegurança favorece uma assistência de qualidade e sem riscos aos pacientes e profissionais de saúde. Objetivo: Identificar o nível de conhecimento sobre medidas de biossegurança em estudantes de enfermagem do último ano de graduação de uma universidade de Barranquilla, Colômbia. Materiais e métodos: Estudo epidemiológico descritivo, transversal, com amostragem não probabilística composta por 89 estudantes. O instrumento utilizado foi o “nível de conhecimento das medidas de biossegurança dos estudantes de enfermagem”. A análise da relação entre as variáveis em estudo e o nível de conhecimento da população-alvo foi realizada através da aplicação do teste Qui-quadrado, com IC 95 %. As técnicas estatísticas foram aplicadas com auxílio do software estatístico Statgraphics, versão 16. Resultados: Prevaleceu o nível de conhecimento médio com 24,72% e baixo com 75,28 %. Além disso, observou-se uma diferença mínima ao relacionar o nível de conhecimento ao semestre letivo, onde 85 % dos entrevistados desconheciam o conceito de resíduo perigoso. Conclusão: O nível médio e baixo de conhecimento representa uma situação alarmante, provavelmente produto do ensino virtual devido ao confinamento durante a pandemia de COVID-19.